實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
腸神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)細(xì)胞類似神經(jīng)系統(tǒng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞，腸神經(jīng)系統(tǒng)以網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)廣泛分布于漿膜下層、縱肌層、肌間層、環(huán)肌層、深肌層、粘膜肌層和粘膜層。腸神經(jīng)膠質(zhì)主要位于腸肌間叢和粘膜下叢神經(jīng)節(jié)，與神經(jīng)節(jié)交織成團(tuán)并與節(jié)間神經(jīng)束相互連接。
腸神經(jīng)膠質(zhì)不但對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)起支持作用，還在調(diào)控神經(jīng)元生長、發(fā)育、神經(jīng)回路功能和細(xì)胞凋亡過程中起重要作用。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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腸組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2311 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1） 組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常腸組織。
2) 細(xì)胞鑒定：GFAP熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5) 細(xì)胞生長方式：不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代 膠質(zhì) 細(xì)胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
多聚半乳糖醛酸酶（polygalacturonase；PG）活性比色法定量檢測試劑盒
細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒
鮭魚促胰液素/胰泌素(SCT)elisa分析檢測試劑盒
通用型1毫升1厘米光徑玻璃比色皿
小鼠雌硫酸轉(zhuǎn)移酶(SULT1E1)elisa檢測試劑盒
人分泌成分(SC)elisa檢測試劑盒
體液肌酸激酶（CK）總活性酶連續(xù)循環(huán)比色法
小鼠皮質(zhì)醇(Cortisol)elisa檢測試劑盒
大鼠冠蛋白1A(CORO1A)elisa檢測試劑盒
磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4抗體 Phospho-Stat4 (Tyr693)
磷酸化組蛋白去乙?；?span>3抗體 Phospho-HDAC3 (Ser424)
E3泛素蛋白連接酶HECW2抗體 NEDL2
ERK2結(jié)合睪丸蛋白1抗體 MICALCL
鋅指蛋白671抗體 ZNF671
鋅指蛋白ZBTB7C抗體 ZBTB7C
腸高血糖素相關(guān)肽抗體 GRPP
促性腺釋放1抗體 GnRH I/GnRH
輸卵管特異性糖蛋白抗體 OVGP1
絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶SIK1抗體 SIK1
PE-Cy5標(biāo)記小鼠CD25單克隆抗體 Mouse CD25(IL2RA)/PE-Cy5
PE標(biāo)記人CD223 (LAG-3)單克隆抗體 human CD223 (LAG-3)/PE
組蛋白去乙酰化酶4+5+9抗體 HDAC4 + 5 + 9
16號(hào)染色體開放閱讀框84抗體 CTU2
恒定生物鐘源蛋白TIM1抗體 Timeless
肌動(dòng)蛋白樣蛋白9抗體 ACTL9
生長(GH)elisa分析檢測試劑盒
狗腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞Chicken IgM / PE
G蛋白偶聯(lián)受體20抗體
Uba1; A1S9; A1S9 protein; A1S9T and BN75 temperature sensitivity complementing; A1S9T; A1ST; GXP 1; GXP1; MGC4781; Protein A1S9; UBA1_HUMAN; UBE 1 ; UBE 1X; UBE1; UBE1X; Ubiquitin activating enzyme E1; Ubiquitin-activating enzyme E1; Ubiquitin-like modifier-activating enzyme 1.
狗腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞
大鼠腸間質(zhì)細(xì)胞
NCI-H1993人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
小鼠精母細(xì)胞；GC-2 spg （種屬鑒定）
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。